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從組織中獲得高活性的單細胞懸液,你只需要gentleMACS這款神器!

時間:2018-09-10 作者:管理員 來源:本站 瀏覽:2025

從組織中獲得高活性的單細胞懸液,你只需要gentleMACS這款神器!

entleMACS ——全自動溫和組織處理器

自動化、標準化的樣本制備方案 

 

快捷:全自動地組織解離,將組織處理成單細胞或勻漿;

穩定:標準化步驟,結果可靠,可重復性高;

   ▲靈活:預設程序及用戶可自定義的程序,幾乎可以處理所有類型的組織。

另有八通道組織處理器,同時處理8個樣本,可根據需求設定不同的程序。


 

組織解離常用酶

1.1. 美天旎組織解離試劑盒

組織解離試劑盒,可以單獨使用,與gentleMACS配合效果更佳哦!



快速:即用型組織解離試劑盒,無需摸索實驗方案

穩定:預先滴定好濃度的酶溶液,無批次間差異,可重復的結果

溫和:高純度的酶 ,無非特異性胰蛋白酶活性 ,不會降解細胞表位

 

針對不同的組織,優化出不同的解離試劑盒。目前已有用于處理腫瘤、腦瘤、神經、脾臟、肝臟、新生兒心臟、表皮、骨骼肌、脂肪、表皮、臍帶、皮膚、胚體腎臟、肺、前列腺等多種組織的解離試劑盒。更多組織樣本,請聯系福麥斯生物,給您最優的解離方案。

使用gentleMACS,不僅可以把組織解離成高活性的單細胞懸液,也可以制備組織勻漿,用于后續的蛋白和分子檢測!

 

1.2. 膠原酶

膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內含較多結締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為最終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為型以及肝細胞專用膠原酶,要根據所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

 

1.3. 胰酶

胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH8.0、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。

1.4. DNA水解酶

組織解離的過程可以會導致一些細胞死亡,死細胞分泌的DNA粘性比較大,所以在組織解離中會加入DNA水解酶使細胞分散。

 

2. 濾器  

小體積樣品過濾(~200mL

2.1. Millex ® 針頭式過濾器小量無菌過濾的金標準

 

不同膜材質用于過濾水溶液、有機溶液和氣體

4, 13, 25, 3350mm直徑等多種選擇,適合不同體積樣品的過濾

特別的全包圍設計,耐壓性好,操作輕松

微量的保留體積,保證最少的樣品損失

全部為單個無菌獨立包裝,使用方便不浪費

 

 

特別提示

去除支原體,使用0.1μm Durpore膜的Millex®

除菌過濾100% DMSODMF溶液,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

除菌過濾10%酚溶液,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

氣體除菌和無菌通氣口,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

澄清和預過濾,使用0.45μm或更大孔徑的Millex® 

 

2.2. Smart Strainer濾器——去除單細胞懸液中的細胞團塊和大顆粒

Smart Strainer濾器:

 

 

可以去除單細胞懸液和血液樣本中的大顆粒或團塊,以及細胞分選前粘連細胞的去除;

有更好的透氣性,可有效避免過濾過程中濾器堵塞的問題;

適用于15ml50ml離心管;

無菌、即用,方便后續無菌應用。

 

2.3. 尼龍網

除了濾器,尼龍網也可過濾較大的團塊和雜質,可用于脾臟等組織的研磨,也可和淋巴細胞分離液配套使用。

3. 混懸儀——保證樣本的充分混合

MACSmix Tube Rotator(混懸儀)

產品描述

無菌

可反復充電,不需要插電源,除正常使用環境外,還可以直接放入培養箱或者冰箱中,避免反復開合培養箱帶來的污染,也減少您的工作量,提供工作效率。

工作溫度2℃-42℃2000mAh已充滿的電池室溫至少運行48小時。

2種不同的試管架:0.5 mL -2 mL5 mL -50 mL,可以根據不同

實驗需求更換。

▲0.5mL-2mL的試管,可同時處理16個;5mL-15mL的試管,可同時

處理8個;50mL的試管,可同時處理4個。

內設5種程序,可選擇不同轉速及是否間斷。

關機鍵,LED燈綠色閃動時表面正在充電,停止閃動表面充電已經完成。

 

應用

酶消化、抗體孵育、磁珠孵育等

▲MACS細胞因子分泌細胞研究

培養箱中試管細胞的短時間培養

免疫沉淀

物質溶解、相分離、抽提等

 

 

腫瘤樣品制備

 

分別采用gentlemacs組織處理系統或者酶消化結合手工解離的方法從15例病人樣本中獲得TILs(腫瘤浸潤淋巴細胞)。用gentlemacs組織處理系統獲得的TILs表現出更高的擴增潛能。   

 

A)使用genltemacs組織處理系統處理頭頸鱗癌病人腫瘤樣

本,獲得TILs后進行流式分析;

B)對野生型C57BL/6小鼠原位注射同源胰腺癌細胞。大約四周后,取出腫瘤并使用genltmacs組織處理系統制備單細胞懸液,然后用流式分析髓系細胞亞群。

 

 

神經樣品制備

 

 

針對不同的樣本,可以選擇不同的組織

解離試劑盒,如下表所示

使用成年鼠腦組織解離試劑盒(ABDK)獲得高得率、高活性、高純度的神經細胞。成年鼠大腦經解離得到的單細胞懸液含有大量的細胞碎片和紅細胞(AB),這會妨礙下游的細胞分選、培養和分析等實驗。ABDK優化了試劑和組織解離方法,獲得的單細胞懸液中僅含有少量的細胞碎片和紅細胞(CD)。

 

石蠟樣品制備

福爾馬林固定的石蠟包埋切片(Formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE))通常會被用于提取DNA,進而做測序研究。但是,常規方法無法將其中的腫瘤細胞和正常細胞區分開,更無法辨別其DNA序列,因此,測序結果很難精確。

為此,美天旎研發出一套FFPE樣本的解離方案,能夠:

 

溫和解離50umFFPE切片組織樣本

與傳統處理方法相比,操作時間更短

保留完整的細胞抗原表位

完美兼容后續的細胞分選,獲得高純度的腫瘤細胞

確保腫瘤細胞測序結果的精確性和可靠性

 

 

專于細胞腫瘤免疫,精于流式磁珠分選

 


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