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細胞養不好,考慮過支原體污染嗎?

時間:2018-09-10 作者:管理員 來源:本站 瀏覽:945

培養細胞時,

發現細胞增殖變慢、

形態漸漸改變,

是血清或培養基的問題嗎?

很有可能是你的細胞污染了。。。。。。。

 

 

支 原 體 污 染

細胞污染可分為細菌、霉菌、酵母菌、支原體污染,其中支原體污染發生的概率>50%支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物,約0.1-0.3μm,可穿透0.22-0.45 μ過濾膜 (BI血清經過30.1μm濾膜并且檢測支原體)

支原體污染棘手的原因之一是沒有如其他污染源“立即可辨”的現象,支原體污染侵襲細胞但是并不一定致死。如果您的細胞出現如下狀態:增殖變慢、形態變差、培養液變黃但是沒有渾濁,說明您的細胞可能正遭受支原體的摧殘!!

受支原體污染的293T

正常無污染的293T

 

支 原 體 檢 測

怎么知道您的細胞正遭受支原體摧殘呢,常見的檢測方法幾種:

1.分離培養法

將可疑樣本接種到支原體培養基中,觀察菌落生成。缺點:培養時間長,須3~5周才能判斷。

2.PCR

利用特異性引物,經PCR反應檢測支原體DNA,靈敏且快速。

BI EZ-PCR支原體檢測試劑盒:

  • 采用PCR法,簡化了細胞培養中支原體污染的檢測過程,可檢測出細胞培養實驗中常見的支原體污染。

  • 試劑盒中包含獨特的反應混合液,以及PCR中需要的所有試劑。使用者只需備有樣品,最后產物跑完膠后,如有一個270bp的片段,則代表有支原體污染,整個檢測過程耗時約4小時。

 

 

 

支 原 體 污 染 處 理

細胞培養常見的支原體污染為6種: 發酵支原體(M.fermentans),唾液支原體(M.salivarum),口腔支原體(M.orale),精氨酸支原體(M.arginini),豬鼻支原體(M.hyorhinis),萊氏無膽甾原體(A.laidlawii)等,有些是動物來源,有些是人來源,支原體沒有細胞壁,所以使用青霉素等破壞細胞壁類藥物不具效用,建議使用專為支原體開發的處理試劑保護您珍貴的細胞。

  1. 支原體污染處理試劑:

上述處理試劑可去除90%以上實驗室常見的支原體污染 (支原體非單一物種,無單一試劑能100%去除支原體污染),不具細胞毒性,方法非常便捷。

 

  1. 支 原 體 污 染 預 防

俗話說,預防勝于治療,所以操作的器材與環境消毒也至關重要:

  1. 超凈工作臺預防

Pharmacidal成分為四苯甲基化合物,不含汞,甲醛,苯酚或酒精。可生物降解,無毒,無刺激,對一般的工作臺和器材表面沒有任何損傷。不需稀釋,每次使用超凈工作臺前或每天噴灑一次臺面,二氧化碳培養箱每兩周一次噴灑消毒,噴灑后讓其自然風干,無需擦拭。

  1. 水盤為維持培養箱濕度所必需,但也成為潛在的污染源

BI Aquaguard-1 (貨號: 01-867-1B 100ml, 稀釋100倍使用) 消毒水盤效果非常好,而且不會腐蝕不銹鋼,無毒,不揮發。

  1. 其他實驗室的水浴環境也容易造成污染

BIAquaguard-2 (貨號: 01-916-1E 50ml, 稀釋500倍使用),可以有效消毒任何形式的水浴環境。

  

Anyway

科研路漫漫,

支原體君常相伴,

還是要做好預防和及時地檢測,

給細胞安全的成長環境

 


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