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文獻解讀

RayBiotech抗體芯片在肝臟疾病研究中的應用

時間:2015-05-19 作者:技術部 來源:本站 瀏覽:2617

 

RayBiotech抗體芯片在肝臟疾病研究中的應用 


雜志名稱:  Liver International (IF 4.412 )   (點擊下載全文)

文獻:Xin J, Ding W, Hao S, et al. Human bone marrow mesenchymal stem cell-derived hepatocytes express tissue inhibitor of metalloproteinases 4 and follistatin[J]. Liver International, 2015.

本實驗所用產品RayBiotechAAH-CYT-G4000抗體芯片

274個生長、趨化、血管、炎癥等細胞因子抗體芯片)

實驗樣品:細胞上清

 

 

研究背景:

人骨髓間充質干細胞(hBMSC)移植有望廣泛應用于肝臟再生、治療肝臟疾病。但是hBMSC

分化為肝細胞的機制尚不清楚。本研究的目的是建立一個特殊功能性的hBMSC源性肝細胞(hBMSC-Heps用于未來的臨床應用。用抗體芯片篩查hBMSC-Heps的潛在生物標志物,用爆發性肝衰竭豬模型體外和體內實驗驗證顯著性差異的標志物。結果顯示經過20天的分化TIMP4follistatin (FST)在功能性hBMSC-Hep中顯著增加,且ELISA驗證結果一致;而activin A, osteoprotegerinPDGF-A顯著降低;豬模型體內實驗hBMSC移植6小時后TIMP4FST顯著升高,在24h48h后達到最大值。免疫組化結果也再次在細胞水平和豬肝中驗證。TIMP4FSThBMSC-Heps的潛在生物標志物,對臨床應用有很大的潛在價值。

研究思路

1 實驗方法

1.1樣品準備

lhBMSC細胞和hBMSC-Heps細胞上清

1.2RayBiotech細胞因子抗體芯片檢測細胞培養上清樣品中274個細胞因子的表達及其差異

RayBiotech夾心法半定量抗體芯片AAH-CYT-G4000來檢測hBMSC細胞分化為hBMSC-Heps前后的細胞上清細胞因子的變化,取0天、10天、20天的細胞上清檢測,芯片數據采用SAM顯著性差異分析方法,結果顯示,有20個細胞因子在hBMSC細胞分化前后的細胞上清中有顯著變化,將這20個因子做非監督的聚類分析,聚類結果顯示這20個因子可以很好的區分hBMSChBMSC-Heps


 

1.3基因功能富集分析

芯片篩選出來的20個細胞因子通過GO基因功能富集分析,得到31個顯著相關的生物學過程(P<0.05),主要包含發育和分化過程、免疫和炎癥過程、應激反應過程等。

 

1.4ELISA驗證和體內和體外免疫組化驗證

從芯片的結果中挑選hBMSC-Heps 20天Fold change變化最大的5個因子來進行ELISA驗證,其中TIMP-4, FST顯著升高的, OPG, PDGF-A 和 activin A顯著降低,ELISA結果顯示與芯片結果一致。因為TIMP-4, FST在hBMSC-Heps細胞上清中表達極高,所以后續采用免疫組化驗證到一致的結果。


 

 

1.5動物模型試驗驗證

將人BMSC 移植至豬體內進行體內驗證,采集豬血清進行ELISA驗證,結果顯示在移植6h后TIMP4和FST開始增高,在24h達到最高值。豬肝進行免疫組化驗證結果顯示,豬肝小葉在hBMSC移植3d和7d后TIMP4和FST陽性表達,而對照豬沒有表達。


 

 

2 結論

本研究結果顯示TIMP4FST兩個細胞因子可能是hBMSC-Heps體內和體外的特征標志物,研究結果為更深一步了解hBMSC-Heps分子機制提供重要信息,對臨床應用有著深遠意義。RayBiotech抗體芯片在該研究中起到非常重要的指引作用,有助于深層次挖掘分子機制。

 

本文使用RayBiotech AAH-CYT-G4000 細胞因子抗體芯片 

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