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文獻解讀

RayBiotech抗體芯片在肝癌研究中的應用

時間:2015-05-19 作者:技術部 來源:本站 瀏覽:2344


肝癌血清標志物篩選


雜志名稱:  Cancer Letters

文獻題目:Heat shock protein gp96 decreases p53 stability by regulating Mdm2 E3 ligase activity in liver cancer

本實驗所用產品:RayBiotech人AAH-APO-1-2抗體芯片

(43個凋亡細胞因子抗體芯片

實驗樣品:細胞裂解液

研究背景:

    肝癌的發生、腫瘤復發、對化療放療的抵抗都與肝癌細胞抵抗凋亡作用息息相關。本文揭示了熱休克蛋白gp96在調節肝癌腫瘤細胞的生長和凋亡的潛在作用。篩查gp96基因敲除肝癌細胞中凋亡相關蛋白,發現p53有明顯變化,過表達或者敲除gp96的實驗都證明gp96可以降低p53蛋白的表達水平,且gp96調控細胞凋亡依賴于p53。進一步的實驗證明gp96與p53和Mdm2的相互作用促進了Mdm2介導的p53的范素化和降解。并且,干擾gp96誘導了肝癌細胞的凋亡抑制腫瘤生長。本文闡明一個潛在的機制gp96通過增加MDM2的E3連接酶活性促進p53降解,為肝癌提供新的治療策略。

研究思路

實驗方法

1.1 樣品準備

  兩個肝癌細胞系(SK-Hep-1和 HepG2);

  正常肝細胞系(L02);

  基因敲除得到穩定的gp96 knock-down細胞系
1.2 RayBiotech凋亡抗體芯片檢測gp96基因敲除后肝癌細胞系的凋亡蛋白表達差異;

1.3 細胞凋亡、細胞周期和細胞增殖實驗;

1.4 免疫共沉淀檢測相互作用蛋白;

1.5 體外P53蛋白范素化檢測;
1.6 鼠腫瘤移植實驗; 

2 結果

2.1 Gp96抑制細胞凋亡以及降低肝癌細胞p53的表達

   

  

2 .2 RayBiotech芯片篩查肝癌細胞gp96基因敲除后凋亡相關蛋白變化

 

采用Ray Biotech AAH-APO-1的凋亡抗體芯片篩查gp96基因敲除和未敲除肝癌細胞凋亡相關蛋白表達差異,篩選到15個蛋白Caspase 3, DR6,bad,bax,IGFBP-5,IGFBP-6, IGF1-sR, HSP27,p21,p53,bcl2,bcl-w,CD40L, TRAILR-1,TRAILR-2在基因敲除細胞中明顯上調,Fold Change 大于1.5倍。  用WB驗證得到一致結果。

 

  

  

 2.3  gp96調控細胞凋亡依賴于p53


 

2.4 免疫共沉淀實驗證明gp96與p53和Mdm2有相互作用

2.5 小鼠腫瘤移植實驗證明gp96促進腫瘤體內生長

 

  


 

本文使用的RayBiotech AAH-APO-1 凋亡抗體芯片

 

bad

bax

bcl-2

bcl-w

BID

BIM

Caspase-3

Caspase-8

CD40
(TNFRSF5)

CD40 Ligand
(TNFSF5)

cIAP-2

Cytochrome C

DR6
(TNFRSF21)

Fas
(TNFRSF6/Apo-1)

Fas Ligand
(TNFSF6)

HSP27

HSP60

HSP70

HTRA2

IGF-1

IGF-2

IGFBP-1

IGFBP-2

IGFBP-3

IGFBP-4

IGFBP-5

IGFBP-6

IGF-1 R

livin

p21

p27

p53

SMAC

Survivin
(BIRC5)

TNF RI
(TNFRSF1A)

TNF RII
(TNFRSF1B)

TNF alpha

TNF beta
(TNFSF1B)

TRAIL R1
(TNFRSF10A/DR4)

TRAIL R2
(TNFRSF10B/DR5)

TRAIL R3
(TNFRSF10C)

TRAIL R4
(TNFRSF10D)

XIAP

 

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