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技術專欄

MACS磁珠分選基礎(一)MACS磁珠及分選策略

時間:2015-10-18 作者:市場部 來源:本站 瀏覽:2710





MACS磁珠及MACS分選策略

1、默天旎的微珠由什么組成?

微珠由多聚糖和氧化鐵組成,可以生物降解,無毒,對細胞無損傷。


2、用MACS微珠分選出來的細胞進行后續實驗時需不需要將磁珠解離掉?

無需解離磁珠,可以直接進行后續實驗:如流式細胞儀分析或分選、細胞培養、分子生物學研究、甚至回輸給人或者動物。

  • 微珠小:僅50nm,不會影響細胞的光散射特性;

  • 微珠少:磁性標記只占用20-30%的表位,不影響分選后的細胞再進行熒光抗體標記。MACS微珠小,不影響細胞的散射特性;

  • 微珠無毒、可生物降解。

2014年1月默天旎的CD34微珠與CliniMACS系統已經獲得美國FDA認證,分選出來的造血干細胞可以用于治療人急性白血病,足以說明默天旎MACS微珠對人體是沒有毒性的。





3、做MACS磁分選時,磁珠與細胞結合的最佳條件是怎樣的?

磁珠與細胞結合最重要的三個因素是:時間、溫度和磁珠濃度。

  • 孵育時間和溫度:

大部分MACS微珠與細胞孵育的最佳時間為15min,而且,建議孵育過程在冰箱或4-8°C下進行。溫度過高或孵育時間過長會引起非特異性標記,導致分選純度下降;如果在冰上進行操作,建議將孵育時間延長,否則,磁珠與細胞不能充分結合,從而影響細胞得率或純度。

當然,也會有一些磁珠的孵育,我們建議在室溫或冰上操作,具體參見相關試劑說明書即可。

  • 磁珠濃度:

磁珠濃度對于其與細胞的結合也是非常重要的,建議您按照說明書進行:大部分磁珠要求1:5稀釋,如10^7細胞重選于80ul分選緩沖液中,然后加20ul磁珠孵育。


4、MACS微珠有哪幾種?

直標微珠、間標微珠和多選微珠。

  • 直標微珠:MACS微珠上耦聯可以直接識別細胞表面分子的單抗,進而標記并捕獲細胞。該方法簡單、一步法標記、特異性好、純度高。

  • 間標微珠:當沒有直標微珠時可采用此策略。兩步法標記:首先,用針對細胞表面分子的一抗來標記細胞;然后選擇針對該一抗的磁珠(如抗熒光素或Ig結構的磁珠)進行二次標記,即可間接標記細胞。

間標磁珠有抗熒光素(FITC、PE、APC等)磁珠、抗生物素磁珠、鏈酶親和素磁珠及Ig磁珠。


5、MACS分選策略有哪些?

MACS分選策略包括:陽性分選、去除分選、多參數分選、多重分選。

  • 陽性分選:目的細胞直接與磁珠結合而被捕獲,因此,陽性分選到的細胞表面帶有磁珠。

  • 去除分選:磁珠結合并捕獲目的細胞以外的細胞,而目的細胞不接觸磁珠。

  • 多參數分選:即根據細胞表面的兩種表面標記來分選目的細胞,如CD4+CD25+調節性T細胞的分選。多參數分選可以選用多選微珠,也可以結合陽性分選和去除分選來完成。

  • 多重分選:正常情況下,用MACS技術分選到的細胞是不需要將微珠解離掉的,但是,我們也專門設計了很多可以解離的微珠,可以用于多參數分選,第一步陽性分選后,將磁珠從抗體上解離下來,這樣陽性分選到的細胞上就不帶磁珠了,然后可以進行第二次磁性標記和陽性分選。因此,可以通過兩次陽性分選得到兩種Marker陽性的細胞群。



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