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技術專欄

MACS磁珠分選基礎(二)MACS分選柱

時間:2015-10-21 作者:市場部 來源:本站 瀏覽:3390





1、為什么MACS磁珠分選要使用分選柱?


?磁珠可以更小:美天旎磁珠直徑只有50nm,普通真核細胞直徑一般大于10um,結合在細胞上的磁珠大小完全可以忽略不計,因此:1、攜帶的磁珠不影響細胞大小——可以直接上流式檢測,不影響FSC數據收集;2、細胞功能不受影響——分選過程中,磁珠的結合不會引起細胞的活化及其它生理狀態的改變,可以保持細胞的原始生理和功能狀態,尤其在Naive免疫細胞的分選中尤為重要。

?抗原表位的占據更少:因為磁場可以被分選柱放大1000-10000倍,所以不需要太多的磁珠結合即可分離不同細胞。約20%-30%的抗原表位被偶聯了磁珠的抗體結合即可將細胞滯留在磁場中,這就為后續實驗預留了足夠的抗原表位,因此,對于表達水平不低的抗原來說,MACS磁珠分選后的細胞可以直接進行相關熒光抗體標記,進而進行流式檢測。

?細胞活力更好:通過分選柱引起的間接磁場放大,使得細胞在磁場中所承受的直接壓力小,讓細胞受力均勻;同時,通過分選柱放大的磁場可以瞬時變大、離開磁場后磁力又瞬間消失,這些都保證了細胞所受機械力小,損傷小,得到的細胞活力高。

?細胞純度更高:通過去除分選柱,可以更好的進行去除分選,提高目的細胞的純度。


2、是不是所有細胞都要從分選柱上重新獲取?

不是。

若使用陽性分選策略,目的細胞是磁性標記的,在分選器和分選柱產生的磁場中滯留后,當分選柱移出分選器,磁場瞬間消失,此時用活塞用力將分選柱中滯留的細胞推出,從而收集到目的細胞;

反之,若使用去除分選策略,此時目的細胞是非磁性標記的,可直接從洗脫液中獲得。


3、MACS分選柱有哪幾種,如何選擇合適的分選柱?

MACS分選柱根據其細胞容量、用途可以分為幾種:

MS、LS、LD、大細胞分選柱、全血分選柱、autoMACS分選柱以及用于生物大分子分離的u柱等,選擇分選柱時要根據您的實驗目的、實驗策略和注重的實驗效果來取舍。




4、MACS分選柱能否重復使用?

普通的MACS分選柱不建議重復使用,但autoMACS分選柱分可以重復使用。


  • 重復使用不能保證無菌,MACS分選柱都是獨立、無菌包裝的,保證分選下來的細胞無污染;

  • 分選柱內填充了經親水包被層處理的鐵珠,如果通過浸泡、洗滌等過程重復使用,那么,鐵珠表面得親水層被破壞,裸露的鐵珠與細胞接觸會對流經的細胞產生損失,影響細胞活力和分選效果。


5、那為什么autoMACS分選柱可以重復使用呢?

autoMACS分選柱可以在兩周之內使用,且最多用100次。

autoMACS分選柱一旦安裝到全自動分選儀上,須保存在液體中,防止分選柱中的填充基質被氧化無法使用。

每次使用后應該按照推薦程序進行沖洗和消毒,以便更好的保存和下一次使用。


6、全血分選柱與普通分選柱有何不同?

  • 全血分選柱有兩層特殊的基質,非磁性層和磁性層;普通細胞分選柱中填充的是均一的親水包被層處理的鐵珠;

  • 全血分選柱柱容量為15ml的全血;

  • 全血分選柱可用于直接從全血中分選細胞,無需進行紅細胞裂解或者密度梯度離心的過程,無需先制備PBMC。


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